关键要点
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采用一步法RT-PCR扩增NDV HN基因
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通过PCR产物的直接测序确定基因序列
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将目的片段克隆至T easy载体中
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用于进一步基因工程苗的研究
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新冠病毒疫苗研究的基础工作
NDV一步法RT-PCR初探及基因克隆测序
这一章节主要介绍了作者使用不同的方法提取模板RNA,并最终采用了RT-PCR一步法扩增出875bp的目的片段,通过PCR产物的直接测序得到了该片段的基因序列。接着,将目的片段克隆到T easy载体中,再次测序并与PCR直接测序结果进行比较。这些研究为以后开展相关的基因工程工作奠定了基础。关键词包括新城疫病毒、HN基因、RT-PCR等。
实验方法与材料:新城疫病毒研究
这一章节主要介绍了实验所需的材料和方法。其中,实验所使用的病毒来自广东省某地方新城疫病毒强毒株,而菌种则是DH5a。此外,实验还使用了T easy vector质粒和根据基因库中的强毒株MIYADERA的HN序列设计的引物。在实验过程中,需要对RNA进行提取,并使用RESNcolumn琼脂糖DNA纯化系统对其进行纯化。最后,通过尿囊腔接种9天龄的鸡胚,收集24小时后死亡的鸡胚尿囊液,从而获得所需样本。
NDV HN基因的RT-PCR扩增与序列分析
这一章节介绍了从鸡胚尿囊液中提取NDV HN基因的方法。其中常规法和Trizol法是两种常用的RNA提取方法,它们的具体步骤有所不同。在得到RNA之后,可以使用一步法进行RT-PCR扩增,最终得到NDV HN基因的片段。接着,可以通过限制性内切酶消化和凝胶电泳来验证PCR产物的大小和纯度。最后,将PCR产物进行分子克隆,并进行序列测定,以便进一步研究和应用。
禽流感病毒NDV的RNA提取和PCR扩增技术研究
这一章节主要介绍了关于禽流感病毒NDV的基因提取和分子克隆实验。其中,作者采用了三种方法对尿囊液中的NDV模板进行了抽提,并通过加大蛋白酶K和SDS的使用浓度以及洗涤沉淀等步骤获得了较好的结果。在RNA的抽提过程中,预防RNA酶的污染也是非常重要的。此外,作者还探讨了RNA模板量的选择、TEasy Vector的克隆以及PCR产物直接测序与克隆后测序的比较等问题。最后,作者引用了多篇相关研究论文作为参考文献。
NDV基因疫苗研究与进展
这一章节介绍了一项研究,研究人员比较了不同的RNA提取方法和一种称为one-step RT-PCR的扩增技术,并比较了PCR产物与已克隆在T载体中的序列的相似性。结果显示两种方法都成功地得到了基因疫苗的片段。此外,该文还提供了多个序列的详细信息。