L05069陈辉-结题论文.doc

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本文通过采用相对便宜的壳聚糖,经甲醛和戊二醛交联修饰制成微珠,进一步通过环氧氯丙烷活化和胰蛋白酶偶联,制成了亲和层析载体,实现了慈菇蛋白酶抑制剂的有效纯化。实验结果显示,这种载体对抑制剂有良好的吸附效果,并成功保持了抑制剂的活性。此外,文中还详细介绍了实验材料、方法及步骤,包括壳聚糖微珠的制备、亲和层析载体的制备、慈菇蛋白酶抑制剂的粗提和纯化过程,以及通过SDS-PAGE和BAEE法对其纯化效果和活力的检测。尽管取得了一定的成果,作者认为在壳聚糖的交联修饰工艺、修饰方法、层析效果对比以及抗虫模型构建等方面还有待进一步研究和优化,以期提高纯化效率和稳定性,为慈菇蛋白酶抑制剂的实际应用打下坚实基础。

关键要点

  1. 利用相对便宜的壳聚糖制备微珠

  2. 经过甲醛和戊二醛交联修饰制备而成的壳聚糖微珠可用于亲和层析载体

  3. 慈菇蛋白酶抑制剂经纯化后仍保留活性

  4. 慈菇蛋白酶抑制剂具有广谱抗虫效果

  5. 壳聚糖修饰方法可继续探索和改进

壳聚糖修饰微珠用于慈菇蛋白酶抑制剂的纯化

这一章节介绍了研究人员使用壳聚糖修饰制成微珠,再通过胰蛋白酶偶联制成亲和层析载体,对慈菇蛋白酶抑制剂进行纯化的实验过程。实验结果显示,该载体对抑制剂有吸附效果,并且能保持其活性。慈菇蛋白酶抑制剂是一种多功能蛋白酶抑制剂,具有丰富的含量、高的比活力和稳定性等特点,在植物抗虫方面有着广阔的应用前景。近年来,关于慈菇蛋白酶抑制剂的研究主要集中在其活性结构中心、抑制机理和基因克隆与转化等方面,而对于如何从中提取、分离和纯化该抑制剂的方法研究较少。壳聚糖作为一种廉价的材料,已被广泛应用于酶和细胞的固定化,同时也可以用于生物大分子的分离和纯化。

壳聚糖微珠的制备及其在亲和层析中的应用

这一章节主要介绍了实验所需的材料、试剂以及仪器设备。其中,材料包括新鲜慈菇、壳聚糖等;试剂包括戊二醛、甲醛、乙酸乙酯等;仪器设备包括电泳槽、脱色摇床、电热恒温鼓风干燥箱等。在制备壳聚糖微珠的过程中,需要将壳聚糖溶解于醋酸溶液中,然后加入Tween-80、乙酸乙酯、Span80等物质进行反应,最后通过加热、加甲醛等方式制成微黄色的壳聚糖微珠。制作亲和层析载体时,需要将壳聚糖微珠活化后再加入胰蛋白酶等物质进行反应,最终得到可用作过柱子的活化亲和层析载体。

慈菇蛋白酶抑制剂提取及鉴定方法

这一章节介绍了从慈菇中提取出蛋白酶抑制剂的方法,包括粗提和纯化两个步骤。首先将慈菇捣碎后加入PBS缓冲液,然后经过离心和超滤等操作得到粗品。接着使用亲和吸附剂对粗提液进行纯化,并通过不同的缓冲液进行洗脱,最终收集到活性性成分。为了鉴定提取出来的蛋白酶抑制剂,还需要进行SDS-PAGE电泳和PAGE明胶电泳等实验。其中,SDS-PAGE电泳可以测定分子量,而PAGE明胶电泳则可用于检测不同性质的蛋白酶抑制剂。最后,通过酶解和染色等步骤,可以进一步确认提取出来的蛋白酶抑制剂的性质和特征。

慈菇蛋白酶抑制剂活力测定及其应用研究

这一章节主要介绍了如何通过BAEE法测定慈菇蛋白酶抑制剂的活力,并给出了具体的操作步骤和注意事项。同时,还展示了经过甲醛和戊二醛交联修饰的壳聚糖微珠以及慈菇蛋白酶抑制剂的检测结果,包括SDS-PAGE凝胶电泳图和PAGE-明胶碱性系统电泳图等。这些结果表明,经过适当处理后的壳聚糖微珠具有较好的稳定性和亲水性,而慈菇蛋白酶抑制剂在适宜的条件下能够保持较高的活性。

慈菇蛋白酶抑制剂活力测定及壳聚糖修饰方法探讨

这一章节主要介绍了慈菇蛋白酶抑制剂的活力测定方法及结果分析。通过对提取出的慈菇蛋白酶抑制剂进行不同倍数的稀释后进行活度测定,得出了其活力范围。此外,该章节还提到了对于壳聚糖的交联修饰工艺和修饰方法的探讨和改进空间。作者指出,虽然已经成功制备了壳聚糖微珠,但在现有条件下仍需要进一步优化制备过程,以获得更好的效果。同时,也可以考虑采用其他试剂进行壳聚糖的修饰,以实现更好的效果。