(黄巧韵)科技创新项目论文.doc

关键要点

1. 实验结果显示，在发酵18个小时时，大肠杆菌的蛋白产量最高。

2. 通过蛋白胶分析系统粗分析，可以得出不同结束时间下的蛋白含量百分比。

3. 经过基因工程改造的大肠杆菌BL21能够表达出目的蛋白。

4. 该实验主要研究了发酵时间和蛋白表达的关系。

5. 参考文献提供了相关研究的背景和参考资料。

利用基因工程技术生产对虾白斑病毒VP28囊膜蛋白的表达及其应用

这一章节介绍了一项关于对虾白斑病毒 VP28 基因克隆及质粒构建与表达的科技创新项目。该项目旨在利用基因工程技术的 PCR 方法体外扩增 WSSV 的 VP28囊膜蛋白基因，将其插入到 pET32 质粒中，将带有 VP28 编码基因的重组质粒转入表达菌中诱导其表达，之后通过微生物发酵技术大量生产 VP28 囊膜蛋白。收集纯化的 WSSV 的 VP28，作为一种添加剂（或者称之为口服疫苗）添加到虾饲料中，使对虾在采食该饲料后获得对 WSSV 的免疫能力。该项目的意义在于可以有效预防和治疗对虾白斑综合症，避免对虾类养殖业造成毁灭性打击。

PCR扩增、片段回收及重组质粒构建

这一章节主要介绍了如何利用PCR技术扩增目标DNA片段，并将其插入到表达载体中进行基因工程操作。具体步骤包括PCR体系的建立、目的片段的回收、质粒的抽提以及目的片段与质粒的连接等。最终通过将连接产物转化进入大肠杆菌中，筛选出含有重组质粒的阳性菌落，从而获得所需的基因工程产品。这些步骤需要严格按照说明书进行操作，才能保证实验的成功率。

大肠杆菌BL21发酵生产VP28的优化研究

这一章节主要介绍了如何利用大肠杆菌来表达一种名为VP28的蛋白质，并且通过优化培养基配方、发酵条件等方法来提高VP28的产量。其中具体步骤包括了PCR扩增、质粒提取、酶切连接反应等技术操作。最后还进行了凝胶电泳和考马斯亮蓝染色等实验验证，以便进一步分析和评估VP28的表达情况。

重组质粒的转化、鉴定及表达产物的检测分析

这一章节主要介绍了DNA重组技术中的转化反应和重组质粒的鉴定方法。首先，在最适培养条件下培养细菌至对数生长后期，然后采用适当的速度离心沉淀菌体，挑选出在氨苄青霉素平板上生长良好的菌落作为模板进行PCR反应。如果PCR产物能够扩增出特异性片段，则说明外源基因已经成功插入到pET32质粒的BamHI和NotI酶切位点之间，并且重组质粒已经转入到大肠杆菌DH5a中。接下来，需要将重组质粒提取出来并将其转化进入大肠杆菌BL21感受态细胞中，再通过PCR反应鉴定转化子。最后，通过对表达菌进行IPTG诱导，可以检测分析表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果，确认是否表达了目标蛋白质。

微生物研究与应用中的实验方法及数据分析

这一章节主要介绍了菌种筛选的方法以及诱导剂对大肠杆菌生长的影响。通过相同的培养条件和诱导条件下诱导表达相同的时间，样品处理条件相同，点样量也相同，可以初步确定某些菌株的活性更高。同时，通过对添加或不添加诱导剂的大肠杆菌发酵液不同发酵时间的吸光值进行比较，发现诱导剂对大肠杆菌后期生长有着明显的影响，添加了诱导剂会使大肠杆菌提早进入平稳期，并且对菌的生长有一定的抑制作用。最后，通过使用超声波破碎器处理样品液并进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳，可以确定VP28囊膜蛋白在菌体分泌部位的位置。