邝昌慧等论文.com(06-04-02)最终稿.doc

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本文介绍了华南农业大学团队开展的一项关于猪食道口线虫病的分子生物学研究。该项目旨在利用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,开发一种快速、安全的食道口线虫鉴别方法。该研究采用PCR扩增猪食道口线虫的ITS-2序列,并结合改良的冷单链构象多态性(Cold-SSCP)技术进行分析。研究结果表明,通过这一技术可以有效区分有齿食道口线虫和四棘食道口线虫,并且发现了样本间的遗传多态性。这项工作的主要贡献在于建立了一种新型的、安全的分子鉴定方法,为进一步研究猪食道口线虫病的防控提供了技术支持。此外,该研究的成功也为其他寄生虫的分子分类和鉴定工作提供了重要参考。

关键要点

  1. 研究利用PCR-SSCP方法对猪食道口线虫进行鉴定,并建立Cold-SSCP鉴别鉴定方法。

  2. 猪食道口线虫ITS-2片段的Cold-SSCP凝胶上出现两种明显的带型,表明样品分属于两个种。

  3. Cold-SSCP方法保留了PCR-SSCP方法的简易性和敏感性,且不存在生物安全性问题。

  4. 研究借鉴了国内外已有的PCR-RFLP、PCR-SSCP等分类鉴定方法。

  5. 该研究对于食道口线虫分类学的研究具有重要意义。

建立猪食道口线虫 Cold-SSCP 鉴别方法及其应用

这一章节主要介绍了一项针对猪食道口线虫的科学研究项目。该项目旨在建立一种新的鉴别方法,以便更好地诊断和治疗这种疾病。通过聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术和Cold-SSCP方法,研究人员成功地鉴定了不同种类的食道口线虫,并且发现了一些多态性现象。这项研究对于畜牧业生产和公共卫生都具有重要意义。

建立猪食道口线虫Cold-SSCP鉴别鉴定方法

这一章节主要介绍了食道口线虫病及其危害,并强调了其对畜牧业生产和公共卫生的重要性。同时,文中提到了食道口线虫的分类鉴定对于相关研究的基础作用,以及传统形态学方法的局限性。在此基础上,文章介绍了一些先进的分子生物学技术,如PCR和PCR-SSCP,用于食道口线虫的分类鉴定。最后,本文还介绍了作者团队所建立的Cold-SSCP鉴别鉴定方法,该方法不仅简便易行,而且不存在生物安全性问题,为猪食道口线虫病的防治等进一步研究奠定了基础。

食道口线虫样品及其PCR扩增实验研究

这一章节主要介绍了研究中的材料和方法。其中,虫体样品来源于中国广东阳江、重庆及湖南的猪宿主体内,经过形态学初步鉴定为食道口线虫,并通过PCR-SSCP或测序定种后使用70%酒精保存。扩增ITS-2的引物为NC2和05.8sF,由上海英骏生物技术有限公司合成。在实验过程中使用的仪器设备和其他材料包括QL-901旋涡混合器、TGL-16B台式离心机、WFH-201型紫外分析仪等。此外还介绍了所使用的试剂盒、感受态细胞、DNA聚合酶等试剂和蛋白酶K、琼脂糖等材料。最后,给出了0.5×TBE电泳缓冲液的配制方法。

昆虫DNA提取与PCR扩增方法

这一章节介绍了虫体处理、虫体材料的裂解以及虫体DNA的抽提和纯化的具体步骤。首先需要将虫体置于离心管中,并用超纯水反复冲洗;接着加入SDS裂解缓冲液消化液和蛋白酶K,进行37℃恒温消化12~48小时;最后使用Promega试剂盒进行DNA的纯化。其中,DNA的提取过程中需要使用清洗树脂和柱洗溶液进行洗涤和去除杂质,最终得到的DNA可以用于PCR扩增等后续实验操作。

DNA凝胶电泳及Cold-SSCP方法操作步骤解析

这一章节介绍了两种不同的DNA检测方法——琼脂糖凝胶电泳和Cold-SSCP方法。其中,琼脂糖凝胶电泳是一种常见的DNA电泳技术,需要使用特殊的凝胶和电泳缓冲液,并且需要注意点样的细节。而Cold-SSCP方法则是一种较为新颖的技术,需要使用特殊的试剂盒和仪器设备,操作步骤也比琼脂糖凝胶电泳更加复杂。不过,这两种方法都可以用于检测DNA序列是否存在变异或突变等问题,对于生物医学研究具有重要意义。