关键要点
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项目名称：对虾白斑病毒 VP28基因克隆及质粒构建与表达
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项目类别：理科类
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项目批准号：L05078
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所在院部：生命科学学院
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申请人为：黄巧韵刘健萍
对虾白斑病毒 VP28 基因克隆及质粒构建与表达
这一章节是一篇关于对虾白斑病毒 VP28 基因克隆及质粒构建与表达的结题报告书。该项目旨在利用基因工程技术的 PCR 方法体外扩增 WSSV 的 VP28囊膜蛋白基因，并将其插入到 pET32 质粒中，转入表达菌中诱导其表达，最终通过微生物发酵技术大量生产 VP28囊膜蛋白。收集并纯化 WSSV 的 VP28，作为一种添加剂（或口服疫苗）添加到虾饲料中，使对虾在采食该饲料后获得对 WSSV 的免疫能力。该项目由黄巧韵和刘健萍两人共同完成，指导教师为胡文锋，指导教师的研究方向包括微生物生理生化、微生物发酵工程、废水生物处理等。
研究白斑综合症病毒囊膜蛋白 VP28 基因的研究方法与进展
这一章节主要介绍了项目研究的内容与方法，包括了基于白斑综合症病毒囊膜蛋白 VP28 基因序列设计的一对引物，通过 PCR 扩增出该囊膜蛋白的基因片段，并将该片段连接到质粒 pET32 上，获得重组质粒 pETVP28，最终将其转化到大肠杆菌 BL21 中进行发酵法合成 VP28 的培养基配方及发酵条件优化的过程。同时，还详细介绍了 PCR 体外扩增、目的片段回收、pET32 质粒抽提、目的片段与质粒的酶切、连接、转化等步骤的具体操作流程。此外，还包括了大肠杆菌 BL21 发酵生产 VP28 培养基配方及发酵条件优化的过程，其中包括了 IPTG 诱导剂对产菌体生产以及产 VP28 的影响、不同营养成分对 VP28 生产的影响、外界环境条件对产 VP28 的影响等内容。
重组质粒构建及其表达产物的检测分析
这一章节介绍了如何通过PCR技术和酶切连接反应来构建重组质粒，并使用转化反应将重组质粒导入大肠杆菌DH5a中。然后通过表达菌的转化和转化子的鉴定，检测分析表达产物，最后进行了菌种筛选和测序。其中还详细描述了诱导剂IPTG对菌体生长及产VP28的影响以及VP28囊膜蛋白在菌体分泌部位的确定。这些步骤都是为了研究目的蛋白的表达和功能，对于生物学实验来说是非常重要的。
大肠杆菌生长过程中不同时间点加入IPTG对其吸光值的影响
这一章节介绍了利用大肠杆菌表达重组蛋白质的方法，并详细描述了实验步骤和结果分析。通过在不同时间点添加IPTG来调节重组蛋白质的表达水平，并使用SDS-PAGE电泳检测目标蛋白的表达情况。同时，该章节还提供了相关的数据表格和图表，方便读者更直观地了解实验结果。
优化诱导剂浓度与蛋白表达量的关系研究
这一章节主要介绍了如何通过添加不同的诱导剂来控制蛋白质的表达量，并且通过实验数据展示了不同浓度的IPTG对大肠杆菌生长曲线和菌液吸光值的影响。其中，0.4mmol/L和0.6mmol/L的IPTG对应的生长曲线峰值最大，而0.2mmol/L的IPTG则对应最低的生长曲线峰值。此外，该章节还提到了使用蛋白胶分析系统可以用来检测蛋白质的表达量。